New User Special Price Expires in

Let's log you in.

Sign in with Facebook


Don't have a StudySoup account? Create one here!


Create a StudySoup account

Be part of our community, it's free to join!

Sign up with Facebook


Create your account
By creating an account you agree to StudySoup's terms and conditions and privacy policy

Already have a StudySoup account? Login here

Microbiology and Man Lab Exam Review

by: Haley Etheridge

Microbiology and Man Lab Exam Review BSC 242

Marketplace > University of Alabama - Tuscaloosa > Biological Sciences > BSC 242 > Microbiology and Man Lab Exam Review
Haley Etheridge
GPA 4.05

Preview These Notes for FREE

Get a free preview of these Notes, just enter your email below.

Unlock Preview
Unlock Preview

Preview these materials now for free

Why put in your email? Get access to more of this material and other relevant free materials for your school

View Preview

About this Document

These notes cover the labs we covered for the first lab exam. I hope they help!
Microbiology and Man
Dr. Daryl Lam
Microbiology, lab
75 ?




Popular in Microbiology and Man

Popular in Biological Sciences

This 6 page Bundle was uploaded by Haley Etheridge on Wednesday March 9, 2016. The Bundle belongs to BSC 242 at University of Alabama - Tuscaloosa taught by Dr. Daryl Lam in Spring 2016. Since its upload, it has received 58 views. For similar materials see Microbiology and Man in Biological Sciences at University of Alabama - Tuscaloosa.

Similar to BSC 242 at UA

Popular in Biological Sciences


Reviews for Microbiology and Man Lab Exam Review


Report this Material


What is Karma?


Karma is the currency of StudySoup.

You can buy or earn more Karma at anytime and redeem it for class notes, study guides, flashcards, and more!

Date Created: 03/09/16
Microbiology Lab Exam #1  Exercise 1­2: Glo Germ Hand Wash Education System  The Glo Germ Hand Wash Education System was developed to train people to wash their  hands more effectively.  The lotion contains minute plastic particles (artificial germs) that fluoresce when illuminated  with ultraviolent (UV) radiation but are invisible with normal lighting.  This provides immediate feedback to the washers as to the effectiveness of their hand washing  and provides information about where they have to concentrate their efforts in the future.  Nontoxic, synthetic fluorescent “germs”  Exercise 3­1: Introduction to the Light Microscope  Bright field microscopy produces an image made from light that is transmitted through a  specimen.  Because most biological specimens are transparent, the contrast between the specimen and the  background can be improved with the application of stains to the specimen.  Image formation begins with light coming from an internal or an external light source.  Light passes through the condenser lens, which concentrates the light and makes illumination  of the specimen more uniform.  Refraction (bending) of light as it passes through the objective lens from the specimen  produces a magnified real image.  Total magnification of the specimen can be calculated by using the following formula: o Total Mag. = Mag. By the Objective Lens (4, 10, 40, 100) X Mag. By the Ocular Lens  (Always 10)  Image clarity is more difficult to maintain as the magnification increases.  Clarity of an image is called resolution.  The limit of resolution (or resolving power) is an actual measurement of how far apart two  points must be for the microscope to view them as being separate.   Numerical aperture is a measure of a lens’s ability to “capture” light coming from the  specimen and use it to make the image.  Using immersion oil between the specimen and the oil objective lens increases its numerical  aperture and, in turn, makes its limit of resolution smaller.  In dark­field microscopy, a special condenser is used so only the light reflected off the  specimen enters the objective.  Phrase contrast microscopy uses special optical components to exploit subtle differences in  the refractive indices of water and cytoplasmic components to produce contrast.  Fluorescence microscopy uses a fluorescent dye that emits fluorescence when illuminated with  ultraviolet radiation.  Course­focus adjustment knob – brings image into focus  Fine­focus adjustment knob – brings the image into sharpest  Exercise 1­4: Common Aseptic Transfers and Inoculation Methods  Aseptically – without contamination of yourself, others, the culture, the sterile medium, or the  surroundings.  A medium that contains living microbes is called a culture.  If a culture contains a single species it is said to be a pure culture.  Limiting aerosol production is a safety issue and not an issue of keeping pure cultures pure.  Minimize the potential of contamination.  Be organized.  Place all media tubes in a test tube rack when not in use whether they are sterile or not.  Take your time.  Never hold a tube culture by its cap.  Hold the inoculating loop or needle like a pencil in your dominant hand and relax.  Adjust your Bunsen burner so its flame has an inner and outer cone.  Broths are used to grow microbes when fresh cultures or large numbers of cells are required.  Agar slants are generally used to grow stock cultures that can be refrigerated after incubation  and maintained for several weeks.  Plated media are typically used for obtaining isolation of species, differential testing, and  quantifying bacterial densities.  In all cases, using these media requires aseptic inoculation in which a portion of an existing pure culture is transferred to a sterile medium to start a new pure culture.  Exercise 2 ­1: Ubiquity of Microorganisms  “Ubiquitous in nature” – this means that the organism being considered can be found just about  everywhere.  Many microorganisms are free living – they do not reside on or in a specific plant or animal  host and are not known to cause disease. They are nonpathogenic.  Other microorganisms are pathogens and generally are associated with their host.  Even many commensal or mutualistic stains inhabiting our bodies are opportunistic  pathogens. That is, they are capable of producing a disease state if introduced into a suitable  part of the body.  Any area, including sites outside the host organism, where a microbe resides and serves as a  potential source of infection is called a reservoir.  Exercise 3 ­10: Bacterial Motility: Wet Mount and Hanging Drop Preparations  A wet mount preparation is made by placing the specimen in a drop of water on a microscope  slide and covering it with a cover glass.  Motility often can be observed at low or high dry magnification, but viewing must be done  quickly because of drying of the preparation.  You should look for independent darting of the cells.  A hanging drop preparation allows longer observation of the specimen because it doesn’t dry  out as quickly.  A thin ring of petroleum jelly is applied around the well of the depression slide. The jelly causes the cover glass to stick to the slide.  The petroleum jelly forms as airtight seal that slows drying of the drop, allowing a long period  for observation of cell size, shape, binary fission, and motility.  Brownian motion – cells will appear to vibrate in place.  With true motility, cells with exhibit independent movement over greater distances.  Bacterial Structure and Simple Stains (pg. 153)  To be visible, the specimen must contrast with the background of the microscope field.  Morphologies  o Bacterial cells are much smaller than eukaryotic cells and come in a variety of  morphologies (shapes) and arrangements. o Cocci (singular coccus) – round; spheres. o Baccilli (singular bacillus) – rods. o Sprilla (singular sprochetes) – flexible spirals. o Virbrios – curved rods. o Pleomorphism – where a variety of cell shapes may be seen in a given sample.  Arrangements o Cell arrangement, determined by the number of planes in which division occurs whether the cells separate after division, is also useful in identifying bacteria. o Diplo – pairs (if the two daughter cells remain attached after division) o Strepto – chains (if the cells continue to divide in the same plane and remain attached to  form a chain). o If a second division occurs in a plane perpendicular to the first, a tetrad is formed. o A third division plane perpendicular to the other two produces a cube­shaped arrangement  of eight cells called a sarcina. o Staphylo – groups (if the division planes are irregular, a cluster of cells is produced).  When examining a slide, look for the most common morphology and most complex  arrangement.  Exercise 3­4: Simple Stains  Stains are solutions consisting of a solvent (water or ethanol) and a colored molecule.  Common basic stains include methylene blue, crystal violet, and safranin.  Basic stains are applied to bacterial smears that have been heat­fixed.  Heat­fixing kills the bacteria, makes them adhere to the slide, and coagulates cytoplasmic  proteins to make them more visible. It also distorts the cells to some extent.  Basic stains have a positively charges chromagen, which forms an ironic bond with the  negatively charged bacterial cell, thus colorizing the cell.  Exercise 3­5: Negative Stains  The negative staining technique uses a dye solution in which the chromogen is acidic and  carries a negative charge.  The negative charge on the bacterial surface repels the negatively charged chromogen, so the  cell remains unstained against a colored background.  The negative staining technique is used to determine morphology and cellular arrangement in  bacteria that are too delicate to withstand heat­fixing.  A negative stain can also be used because it produces minimal cell shrinkage.  Nigrosin stain  Acidic stains have a negatively charges chromogen that is repelled by negatively charged cells.  Thus, the background is colored and the cell remains transparent.  Exercise 3­6: Gram Stain  Differential stains allow a microbiologist to detect differences between organisms or  differences between parts of the same organism.  The Gram stain is a differential stain in which a decolorization step occurs between the  applications of two basic stains.  The primary stain is crystal violet.  Iodine is added as a mordant to enhance crystal violet staining by forming a crystal violet­  iodine complex.  Decolorization with an alcohol solution follows and is the most critical step in the procedure.  Gram­negative cells are decolorized by the solution (that is, they lost the crystal violet stain)  whereas Gram­positive cells are not.   Gram­negative cells can thus be colorized by the counterstain safranin.  Gram­positive cells appear purple and Gram­negative cells appear reddish­pink.  Gram­negative cell walls have a higher lipid content (because of the outer membrane) and a  thinner peptidoglycan layer than Gram­positive cell walls.  The alcohol/acetone in the decolorizer extracts the lipid, making the Gram­negative wall more  porous and incapable of retaining the crystal violet­iodine complex, thereby decolorizing it.  It is possible to over decolorize by leaving the alcohol on too long and get reddish Gram­ positive cells.  It is also possible to under decolorize and produce purple Gram­negative cells.  Gram Stain Procedure: 1. Heat fix slide 2. Cover the slide: gram +, unknown mixture, gram – 3. Let it dry and then heat fix again 4. Cover slide with crystal violet stain. Let it sit for 1 min and then rinse. 5. Cover the smear with Gram’s stain for 1 minute. Then rinse. 6. Decolorize with ethanol by allowing it to trickle down the slide until the run­off is clear.  Generally, 10 seconds is the maximum time needed for this. 7. Counterstain with safranin stain for 1 minute. Rinse with distilled water. 8. Gently blot dry with bibulous paper.  Exercise 1­5: Streak Plate Methods of Isolation  A microbial culture consisting of two or more species is said to be a mixed culture.  A pure culture contains only a single species.  A commonly used isolation technique is the streak plate.  A bacterial sample is streaked over the surface of a plated agar medium.  During streaking, the cell density decreases, eventually leading to individual cells being  deposited separately on the agar surface.  Cells that have been sufficiently isolated will grow into colonies consisting only of the original  cell type.  Because some colonies form from individual cells and others from pairs, chains, or clusters of  cells, the term colony­forming unit (CFU) is a more correct description of the colony origin.  A quadrant streak is generally used with samples suspected of high cell density, whereas a  simple zigzag pattern may be used for samples containing lower cell densities.  Exercise 3­7: Acid Fast Stains  The presence of mycolic acids in the cell walls of acid­fast organisms is the cytological basis  for the acid­fast differential stain.  Mycolic acid is a waxy substance that gives acid­fast cells a higher affinity for the primary stain and resistance to decolorization by an acid alcohol solution.  Kinyoun (K) Method is a ‘cold’ stain.  The waxy wall of acid­fast cells repels typical aqueous stains.  The K method uses a slightly more lipid­soluble and concentrated carbolfuschsin as the  primary stain.  These properties allow the stain to penetrate the acid­fast walls without the use of heat but make  this method slightly less sensitive than the ZN method.  Decolorization with acid alcholol is followed by a contrasting counterstain, such as brilliant  green or methylene blue.  The acid­fast stain is a differential stain used to detect cells capable of retaining a primary  stain when treated with an acid alcohol.  Acid­fast cells stain reddish­purple; acid­fast negative cells stain blue or the color of the  counterstain is a different one is used.  Exercise 3­8: Capsule Stain  Capsules are composed of mucoid polysaccharides or polypeptides that repel most stains.  The capsule stain technique takes advantage of this characteristic by staining around the cells.  The capsule remains unstained and appears as a white halo between the cells and the colored  background.  This technique begins in the negative stain; cells are spread in a film across the slide with an  acidic stain and are not heat fixed.  Heat­fixing causes the cells to shrink, leaving an artificial white halo around them that might be  interpreted as a capsule.  The capsule stain is a differential stain used to detect cells capable of producing an  extracellular capsule.  Capsule production increases virulence in some microbes.  The acidic stain colorizes the background while the basic stain colorizes the cell, leaving the  capsules as unstained, white clearings aroung the cells.  Exercise 3­9: Endospore Stain  An endospore is a dormant form of the bacterium that allows it to survive poor environmental  conditions.  Spores are resistant to heat and chemicals because of a tough outer covering made of the protein keratin.  The keratin also resists staining, so extreme measures must be taken to stain the spore.  In the Schaeffer­Fulton method, a primary stain of malachite green is forced into the spore by  steaming the bacterial emulsion. Alternatively, malachite green can be left on for 15 mins or  more to stain the spores.  Malachite green is water­soluble and has a low affinity for cellular material, so vegetative cells  and spore mother cells can be decolorized with water and counterstained with safranin.  Spores may be located in the middle of the cell (central), at the end of the cell (terminal), or  between the end and the middle of the cell (subterminal).  Spores also may be differentiated based on shapes – either spherical or elliptical (oval) – and  size relative to the cell.  Upon completion, spores are green, and vegetative and spore mother cells are red.  The spore stain is a differential stain used to detect the presence and location of spores in  bacterial cells.  Reactions to Know  S. Epidermidis  Gram + (black­purple)  E. Coli  Gram – (reddish­pink)  Mycobacterium Kansasii  Acid­Fast + (reddish­purple)  Klebsiella Pneumoniae  Capsule + (red background with pink center)  Bacillius Subtilis  Endospore +


Buy Material

Are you sure you want to buy this material for

75 Karma

Buy Material

BOOM! Enjoy Your Free Notes!

We've added these Notes to your profile, click here to view them now.


You're already Subscribed!

Looks like you've already subscribed to StudySoup, you won't need to purchase another subscription to get this material. To access this material simply click 'View Full Document'

Why people love StudySoup

Bentley McCaw University of Florida

"I was shooting for a perfect 4.0 GPA this semester. Having StudySoup as a study aid was critical to helping me achieve my goal...and I nailed it!"

Anthony Lee UC Santa Barbara

"I bought an awesome study guide, which helped me get an A in my Math 34B class this quarter!"

Jim McGreen Ohio University

"Knowing I can count on the Elite Notetaker in my class allows me to focus on what the professor is saying instead of just scribbling notes the whole time and falling behind."


"Their 'Elite Notetakers' are making over $1,200/month in sales by creating high quality content that helps their classmates in a time of need."

Become an Elite Notetaker and start selling your notes online!

Refund Policy


All subscriptions to StudySoup are paid in full at the time of subscribing. To change your credit card information or to cancel your subscription, go to "Edit Settings". All credit card information will be available there. If you should decide to cancel your subscription, it will continue to be valid until the next payment period, as all payments for the current period were made in advance. For special circumstances, please email


StudySoup has more than 1 million course-specific study resources to help students study smarter. If you’re having trouble finding what you’re looking for, our customer support team can help you find what you need! Feel free to contact them here:

Recurring Subscriptions: If you have canceled your recurring subscription on the day of renewal and have not downloaded any documents, you may request a refund by submitting an email to

Satisfaction Guarantee: If you’re not satisfied with your subscription, you can contact us for further help. Contact must be made within 3 business days of your subscription purchase and your refund request will be subject for review.

Please Note: Refunds can never be provided more than 30 days after the initial purchase date regardless of your activity on the site.