×
Log in to StudySoup

Forgot password? Reset password here

SPC - BIOL 102 - Class Notes - Week 2

Created by: Ankita Mishra Elite Notetaker

Schools > St Petersburg College > Microbiology > BIOL 102 > SPC - BIOL 102 - Class Notes - Week 2

SPC - BIOL 102 - Class Notes - Week 2

This preview shows pages 1 - 5 of a 30 page document. to view the rest of the content
background image Theme 1. Microbiological laboratory. Methods for studying microorganisms. The morphology of microorganisms. Simple staining methods The learning objectives for this lesson are that: o you will know about rules in the microbiological laboratory;  o you will capture microscopic research method using an immersion system; o you   will   understand   how   to   investigate   the   morphological   characteristics   of different microorganisms;  o you will also apply the technique of simple staining methods for coloring of smear preparations. Outlines 1.   Microbiological   laboratory.   Equipment,   workplace   organization.   Safety   rules   for working with microbial cultures. 2. Methods for studying microorganisms. Microscopic study method. Types of modern microscopes. Immersion microscopy. 3. The principles of microorganisms classification. The organisms classification based on morphological and tinctorial characteristics. 4. Stages of preparing smears, their fixation. Simple staining methods. Materials and Equipment Microscopes. A set of ready­made solutions, paints in bottles. Black mascara. Flasks and needles. The slides, cover slips, glass bridge in the bath for staining, distilled water. Disinfectant,
cotton wool, flannel cloth, pencil on glass, immersion oil, filter paper, matches, alcohol burners
(spirit lamps). Pure cultures of microorganisms grown on agar medium.
Microbiology Lab Practices and Safety Rules 1. Wash your hands with disinfectant soap when you arrive at the lab and again before you leave. 2. Absolutely no food, drinks, chewing gum, or smoking is allowed in the laboratory. Do not put anything in your mouth such as pencils, pens, labels, or fingers. Do not store food in
areas where microorganisms are stored.
3. Bring to class and use a lab coat and safety glasses. This garment must cover your arms and be able to be removed without pulling it over your head. Leave protective clothing in the lab
and do not wear it to other non­lab areas.
4. Avoid loose fitting items of clothing. Wear appropriate shoes (sandals are not allowed) in the laboratory. Use only indoor shoes. Long hair must be tied back in such a manner as to not
be in danger of catching fire.
1
background image 5. Keep your workspace free of all unnecessary materials. Backpacks, purses, and coats should be placed in the cubbyholes by the front door of the lab. Place needed items on the floor
near your feet, but not in the aisle.
6. Disinfect work areas before and after use with 70% ethanol or fresh 10% bleach. Laboratory   equipment   and   work   surfaces   should   be   decontaminated   with   an   appropriate
disinfectant on a routine basis, and especially after spills, splashes, or other contamination..
7. Replace caps on reagents, solution bottles, and bacterial cultures. Do not open Petri dishes in the lab unless absolutely necessary. 8. Inoculating loops and needles should be flame sterilized in an alcohol burner before you lay them down. 9. Turn off alcohol burners when they are not used. Long hair must be restrained if alcohol burners are in use. 10. When you sterilize in flame with alcohol, be sure that you do not have any papers under you. 11. Treat all microorganisms as potential pathogens. Use appropriate care and do not take cultures out of the laboratory. 12.   Wear   disposable   gloves   when   working   with   potentially   infectious   microbes   or samples (e.g., sewage). If you are working with a sample that may contain a pathogen, then be
extremely careful to use good bacteriological technique.
13. Sterilize equipment and materials. 
14. Never pipette by mouth. Use a pipetting aid or adjustable volume pipettors. In the
distant past, some lab personnel were taught to mouth pipette. This practice has been known to
result   in   many   laboratory­acquired   infections.   With   the   availability   of   mechanical   pipetting
devices, mouth pipetting is strictly prohibited.
15. Consider everything a biohazard. Do not pour anything down the sink. Autoclave liquids and broth cultures to sterilize them before discarding. 16.   Dispose   of   all   solid   waste   material   in   a   biohazard   bag   and   autoclave   it   before discarding in the regular trash. 17. Dispose of broken glass in the broken glass container.
18. Dispose of razor blades, syringe needles, and sharp metal objects in the “sharps”
container. 19. Report spills and accidents immediately to your teacher. Clean small spills with care. Seek help for large spills. 20. Report all injuries or accidents immediately to the teacher, no matter how small they seem. Biological Safety Cabinet A   biological   safety   cabinet   (BSC)   is   used   as   a   primary   barrier   against   exposure   to infectious biological agents. A BSC has High Efficiency Particulate Air (HEPA) filters. The
airflow in a BSC is laminar, i.e. the air moves with uniform velocity in one direction along
parallel flow lines. Depending on the design, a BSC may be vented to the outside or the air may
be exhausted into the room. BSCs are not chemical fume hoods. A percentage of the air is
2
background image recirculated   in   most   types   of   BSCs.   HEPA   filters   only   trap   particulates,   allowing   any
contaminant in non­particulate form to pass through the filter.
Proper Use of Biological Safety Cabinets 1. Operate the cabinet for five minutes before and after performing any work in it in order to purge airborne contaminants.  2. Before and after use, wipe the surface of the BSC with a suitable disinfectant, e.g., 70 alcohol or a 10% bleach solution. 3. Place everything you will need inside the cabinet before beginning work, including a waste container. You should not have to penetrate the air barrier of the cabinet once work has
begun.
4. Do not place anything on the air intake grills, as this will block the air supply.
5. You should prevent unnecessary opening and closing of door because this will disrupt
the airflow of the cabinet. 6. Always wear a lab coat while using the cabinet and conduct your work at least four inches inside the cabinet. 7. Place burners to the rear of the cabinet to reduce air turbulence.
8. Do not work in the BSC while the ultraviolet light is on. Ultraviolet light can quickly
injure the eye. 9.   When   finished   with   your   work   procedure,   decontaminate   the   surfaces   of   any equipment. 10. Remove the equipment from the cabinet and decontaminate the work surface.
11. Thoroughly wash your hands and arms.
Principles of Light Microscopy The light microscope, so called because it employs visible light to detect small objects, is probably the most well­known and well­used research tool in biology. Yet, many students and
teachers are unaware of the full range of features that are available in light microscopes. Since
the cost of an instrument increases with its quality and versatility, the best instruments are,
unfortunately, unavailable to most academic programs. However, even the most inexpensive
"student"   microscopes   can   provide   spectacular   views   of   nature   and   can   enable   students   to
perform some reasonably sophisticated experiments.
A beginner tends to think that the challenge of viewing small objects lies in getting enough magnification. In fact, when it comes to looking at living things the biggest challenges
are, in order,
obtaining sufficient contrast finding the focal plane obtaining good resolution recognizing the subject when one sees it The   smallest   objects   that   are   considered   to   be   living   are   the   bacteria.   The   smallest bacteria can be observed and cell shape recognized at a mere 100x magnification. They are
invisible in bright field microscopes, though. These pages will describe types of optics that are
3
background image used to obtain contrast, suggestions for finding specimens and focusing on them, and advice on
using measurement devices with a light microscope.
The Bright­Field Microscope In light microscopy, light typically passes through a specimen and then through a series of magnifying lenses. The most common type of light microscope, and the easiest to use, is the
bright­field microscope, which evenly illuminates the field of view.
  Magnification 4
background image The modern light microscope has two magnifying lenses – an  objective lens  and an ocular lens – and is called a compound microscope. These lenses in combination visually enlarge
an object by a factor equal to the product of each lens’ magnification. For example, an object is
magnified 1,000­fold  when it is viewed through a 10μ ocular lens in conjunction with a 100μ
objective lens. Most compound microscopes have a selection of objective lenses that are of
different   powers   –   typically   4μ,   10μ,   40μ,   and   100μ.   This   makes   a   choice   of   different
magnifications possible with the same instrument.
The  condenser lens  does not affect the magnification but, positioned between the light source and the specimen, is used to focus the light on the specimen. Resolution The usefulness of a microscope depends both on its degree of magnification, and its ability to clearly separate, or  resolve,  two objects that are very close together. The  resolving
power is defined as the minimum distance existing between two objects when those objects can
still be observed as separate entities. The resolving power therefore determines how much detail
actually can be seen. 
The resolving power of a microscope depends on the quality and type of lens, wavelength of the light, magnification, and how the specimen under observation has been prepared. The
maximum resolving power of the best light microscope is 0.2 μm. This is sufficient to observe
the general morphology of a prokaryotic cell but too low to distinguish a particle the size of most
viruses. 
To obtain maximum resolution when using certain highpower objectives such as the 100μ lens, oil must be used to displace the air between the lens and the specimen. This avoids the
bending of light rays, or refraction,
 that occurs when light passes from glass to air. Refraction can prevent those rays from entering the relatively small openings of higher­power objective
lenses. The oil has nearly the same refractive index as glass. Refractive index is a measure of the
relative velocity of light as it passes through a medium. As light travels from a medium of one
refractive index to another, those rays are bent. When oil displaces air at the interface of the glass
slide and glass lens, light rays pass with little refraction occurring.
The Phase­Contrast Microscope The  phase­contrast   microscope  amplifies  the   slight   difference   between   the   refractive index of cells and the surrounding medium, resulting in a darker appearance of the denser
material
.  As light passes through cells, it is refracted slightly differently than when it passes through its surroundings. Special optical devices boost those differences, thereby increasing the
contrast.
The Interference Microscope The interference microscope causes the specimen to appear as a three­dimensional image. This microscope, like the phase­contrast microscope, depends on differences in refractive index
as light passes through different materials. The most frequently used microscope of this type is
the  Nomarski   differential   interference  contrast   (DIC)   microscope,  which   has   a   device   for
separating light into two beams that pass through the specimen and then recombine. The light
5

This is the end of the preview. Please to view the rest of the content
Join more than 18,000+ college students at St Petersburg College who use StudySoup to get ahead
School: St Petersburg College
Department: Microbiology
Course: Microbiology
Professor: Berte
Term: Summer 2016
Tags: microbiology lab
Name: Microbiology lab theory about microorganisms
Description: It's covers the microbiology lab work.
Uploaded: 04/02/2018
30 Pages 124 Views 99 Unlocks
  • Better Grades Guarantee
  • 24/7 Homework help
  • Notes, Study Guides, Flashcards + More!
Join StudySoup for FREE
Get Full Access to SPC - BIOL 102 - Class Notes - Week 2
Join with Email
Already have an account? Login here